۳-۱ دستگاه های مورد استفاده
انکوباتور
اتوکلاو
ورتکس
هود شیمیایی
هود لامینار
pH متر
میکروسکوپ
یخچال
هیتر
کریمپر
ترازوی دیجیتال
۳-۲ وسایل مورد نیاز
لوله آزمایش
بشر
مزور
پلیت
سمپلر
سرنگ
ویال
لام
ارلن
گاز _۲N
گاز _۲CO
۳-۳ مواد مورد استفاده
محیط کشت BSM : این محیط کشت در شروع کار استفاده می شود و برای جداسازی NRB و حذف SRB های رقیب به کار میرود.

محیط کشت نوترینت براث : از این مجیط کشت برای مرحله غنی سازی استفاده میشود.
محیط کشت MSM : این محیط برای مرحله شناسایی و جداسازی و تست CHN مورد استفاده قرار می گیرد.
محیط کشت نیترات براث : این محیط کشت برای تست احیای نیترات به کار برده می شود.
محیط کشت BHI : این محیط کشت شناسایی بیوسورفکتانت به کار میرود.
محیط کشت جامد ( Blood Agar ) : این محیط کشت نیز مانند محیط کشت BHI برای شناسایی بیوسورفکتانت استفاده می شود.
Trace element ، محلول ویتامین، رزازورین ، NaCl ، نفت خام ، محلول آلفا نفتیل آمین ۵ % ، سولفانیک اسید ۸ % ، رنگ های کریستال ویوله ، لوگل ، سافرانین ، مرکب چین ، گلوکز ، آگار ، خون گوسفندی ، الکل ، استون
۳-۴ مراحل انجام آزمایش
مراحل آزمایش شامل نمونه برداری، غربالگری و غنی سازی بی هوازی باکتری های نفتی، جداسازی و تخلیص، تست احیای نیترات، تست CHNS و آزمایش های مبتنی بر وجود بیوسورفکتانت می باشد، که آزمایش های مبتنی بر وجود بیوسورفکتانت شامل محیط کشت جامد Blood Agar، محیط کشت خوندار BHI و تکنیک پخش شدن نفت (Oil Spreading Technique) می باشد.
۳-۴-۱ نمونه برداری
نمونه برداری توسط تکنسین متخصص صنعت نفت صورت گرفت، که نمونه ها از طریق هلیکوپتر به آزمایشگاه منتقل شده و در دمای آزمایشگاه نگه داری شدند.
نمونه های استفاده شده، شامل نمونه های نفتی سکوهای زیر می باشد :
سکوی سروش شماره ۱۸ با دمای ۸۵ درجه سانتی‌گرا د
سکوی نوروز جدید با دمای ۵۷ درجه سانتی‌گراد
سکوی نفت خام میدان نوروز با دمای ۴۰ درجه سانتی‌گراد
سکوی بلال با دمای ۶۰ درجه سانتی‌گراد
سکوی R4 لاوان چاه شماره ۲۵ با دمای ۶۰ درجه سانتی‌گراد
سکوی R1 جزیره لاوان چاه شماره ۱۱ با دمای ۶۰ درجه سانتی‌گراد
سکوی R1 با دمای ۵۵ درجه سانتی‌گراد
سکوی R4 با دمای ۵۶.۲ درجه سانتی‌گراد
سکوی سلمان با دمای ۳۴-۴۰درجه سانتی گراد
۳-۴-۲ غربالگری و غنی سازی بی هوازی باکتریهای نفتی
برای شروع کار از محیط کشت BSM برای غنی سازی باکتریهایی که از نفت به عنوان تنها منبع کربن و انرژی استفاده می کنند، حذف مابقی باکتریهای هتروتروف هوازی و حذف SRB های رقیب استفاده شد.
این محیط شامل ۴ گرم K₂HPO₄، ۲ گرم NH₄Cl، ۲ گرم ۶H₂O. MgCl₂،
۱/۰ گرمO₂H 2. _۲lCaC، ۴ گرمNa₂HPO₄، ۱/۰ گرم ۲H₂O. _۳FeCl ، Trace Element ، رزازورین و ویتامین می باشد که تمامی این مقادیر در حجم ۱۰۰۰ میلی لیتر می باشد. از آنجایی که ما این محیط را در حجم ۱۲۵میلی لیتر می خواهیم، بنابراین برای ساختن این محیط ما به میزان ۵/۰ گرم HPO₄₂K، ۵/۰ گرم PO₄H₂Na، ۲۵/۰ گرم Cl₄NH ، ۲۵/۰ گرم O₂H6. gCl₂M، ۰۱۲۵/۰ گرم O₂H 2. _۲lCaC و ۱۲۵/۰ گرم o _۲H2. _۳FeCl نیاز داریم.