پایان نامه بررسی ارتباط تشکیل بیوفیلم باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن |
 |
استاد راهنما:
نازیلا ارباب سلیمانی
استاد مشاور:
الهه تاج بخش
تکه هایی از متن به عنوان نمونه :
| فهرست مطالب | ||
| عنوان | صفحه | |
| چکیده | ۱ | |
| فصل اول: کلیات تحقیق | ||
| مقدمه | ۲ | |
| فصل دوم: مروری بر تحقیقات گذشته | ||
| ٢ـ١ـ اشریشیا کلی یوروپاتوژن (Uropathogenic E.coli; UPEC) | ۴ | |
| ٢ـ٢ـ فاکتور های بیماری زای تولید شده توسط UPEC | ۵ | |
| ٢ـ٢ـ١ـ ادهسین ها و فاکتور های موثر در کلونیزاسیون | ۵ | |
| ١_٢_٢_١_ پیلی یا فیمبریه (Fimbriae) | ۵ | |
| ٢_٢_٢_١_ فیمبریه نوع | ۶ | |
| ٣_٢_٢_١_ فیمبریه P | ۷ | |
| ۴_٢_٢_١_ فیمبریه S | ۸ | |
| ۵_٢_٢_١_ تاژک و تحرک | ۹ | |
| ۶_٢_٢_١_ Curli | ۱۰ | |
| ٧_٢_٢_١_ پیلی F جنسی | ۱۱ | |
| ٢ـ٢ـ٢ـ توکسین ها | ۱۱ | |
| ١_٢_٢_٢_ آلفا همولیزین | ۱۲ | |
| ٢_٢_٢_٢_ فاکتور نکروز دهنده سیتوتوکسیک (CNF_1) | ۱۲ | |
| ٢ـ٢ـ٣ـ بقاء و فرار از سیستم ایمنی | ۱۲ | |
| ١_٢_٢_٣_ سیدروفور ها (آئروباکتین) | ۱۲ | |
| ٢_٢_٢_٣_ کپسول پلی ساکاریدی | ۱۳ | |
| ٣_٢_٢_٣_ تشکیل بیوفیلم | ۱۴ | |
| ٢ـ٣ـ عفونت های مجاری ادراری( Urinary Tract Infection; UTI) | ۱۴ | |
| ٢ـ٣ـ١ـ نقش پیلی در عفونت های مجاری ادراری | ۱۶ | |
| ٢ـ۴ـ بیوفیلم ها | ۱۷ | |
| ٢ـ۴ـ١ـ توسعه بیوفیلم | ۱۸ | |
| ٢ـ۴ـ٢ـ مقاومت آنتی بیوتیکی در بیوفیلم ها | ۲۰ | |
| ٢ـ۴ـ٣ـ بررسی ارتباط بین تشکیل بیوفیلم، فاکتورهای یوروویرولان و مقاومت ضد میکروبی | ۲۲ | |
| ٢ـ۵ـ نقش آب گریزی (Hydrophobicity) در اتصال باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن | ۲۳ | |
| فصل سوم : مواد و روش ها | ||
| ٣ـ١ـ مواد و وسایل | ۲۴ | |
| ٣ـ١ـ١ـ محیط های کشت استفاده شده | ۲۴ | |
| ٣ـ١ـ٢ـ مواد شیمیایی | ۲۴ | |
| ٣ـ١ـ٣ـ کیت ها | ۲۴ | |
| ٣ـ١ـ۴ـ دستگاه ها | ۲۴ | |
| ٣ـ٢ـ جمع آوری نمونه ها | ۲۵ | |
| ٣ـ٣ـ جداسازی و خالص سازی | ۲۵ | |
| ٣ـ۴ـ مشاهده میکروسکوپی | ۲۵ | |
| ٣ـ۵ـ بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی باکتریUPEC | ۲۶ | |
| ٣ـ۶ـ بررسی تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت | ۲۶ | |
| ٣ـ٧ـ بررسی هیدروفوبیسیتی UPEC با بهره گرفتن از هیدروکربن اکتان | ۲۶ | |
| ٣ـ٨ـ استخراج DNA با بهره گرفتن از کیت استخراج DNA شرکت سینا ژن | ۲۸ | |
| ٣ـ٩ـ تعیین کیفیت DNA با بهره گرفتن از الکتروفورز بر روی ژل آگاروز | ۲۸ | |
| ٣ـ١٠ـ PCR چند گانه (Multiplex PCR) | ۲۹ | |
| ٣_١١_ الکتروفورز ژل آگارز | ۳۱ | |
| فصل چهارم: نتایج | ||
| ۴ـ١ـ آزمایشات تشخیصی برای تعیین اشریشیا کلی یوروپاتوژن (UPEC) | ۳۳ | |
| ۴ـ٢ـ فراوانی باکتریهای بیماریزای جدا شده از ادرار | ۳۴ | |
| ۴ـ٣ـ بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری UPEC | ۳۴ | |
| ۴ـ۴ـ بررسی تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت | ۳۶ | |
| ۴ـ۵ـ بررسی هیدروفوبیسیتی UPEC با بهره گرفتن از هیدروکربن اکتان | ۳۸ | |
| ۴ـ۶ـ PCR چند گانه (Multiplex PCR) | ۴۰ | |
| فصل پنجم: بحث و نتیجه گیری | ||
| ۵ـ١ـ بررسی مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری UPEC | ۵۲ | |
| ۵ـ٢ـ بررسی تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت | ۴۴ | |
| ۵ـ٣ـ بررسی هیدروفوبیسیتی UPEC با بهره گرفتن از هیدروکربن اکتان | ۴۵ | |
| ۵ـ۴ـ PCR چند گانه (Multiplex PCR) | ۴۶ | |
| نتیجه گیری | ۴۸ | |
| پیشنهادات | ۴۹ | |
| منابع و مآخذ | ۵۰ | |
| چکیده انگلیسی | ۵۷ | |
| فهرست شکل ها | |
| عنوان | صفحه |
| شکل ١_١_ تفاوت Pili و Curli | ۱۱ |
| شکل ١_٢_ کپسول پلی ساکاریدی | ۱۳ |
| شکل١_٣_ مراحل توسعه یافتگی بیوفیلم | ۱۹ |
| شکل۴_١_ کلنی ها با جلای فلزی UPEC | ۳۴ |
| شکل ۴_٢_ باسیل های گرم منفی UPEC | ۳۴ |
| شکل ۴_٣_ محیط های افتراقی جهت بررسی E.coli جدا شده از ادرار | ۳۴ |
| شکل ۴_۴_ هاله عدم رشد UPEC در حضور آنتی بیوتیک ها | ۳۶ |
| شکل ۴_۵_ تشکیل بیوفیلم UPEC با روش میکروتیتر پلیت با بهره گرفتن از روش اتصال به کریستال ویوله (CV) | ۳۷ |
| شکل ۴_۶_ بررسی هیدروفوبیسیتی(قدرت اتصال) UPEC با بهره گرفتن از هیدروکربن اکتان | ۳۹ |
| شکل ۴_٧_ نتایج الکتروفورز محصولPCR جهت شناساییژن هایpap (328 bp) و sfa (410 bp | ۴۱ |
چکیده
عفونت دستگاه ادراری یکی از شایعترین عفونت های بیمارستانی است که از کلونیزه شدن اشرشیا کلی یوروپاتوژن در اپیتلیوم مخاطی میزبان ناشی می شود و به بافت میزبان آسیب می رساند. ساختارهای مختلف سطح سلولی در تشکیل بیوفیلم در اشرشیاکلی یوروپاتوژن دخیل هستند. از جمله فاکتورهای سطحی در اتصال باکتری و تشکیل بیوفیلم، پیلی P و S می باشد. هدف از این مطالعه تعیین میزان مقاومت آنتی بیوتیکی ، بررسی تشکیل بیوفیلم اشریشیا کلی یوروپاتوژن، سنجش قدرت اتصالی یا خاصیت هیدروفوبیسیتی آن و بررسی وجود ژن های فیمبریه ای pap وsfa و ارتباط آنها در تشکیل بیوفیلم بود.
در این تحقیق تعداد ۱۰۰ نمونه از کشت باکتری بیماران مشکوک به عفونت دستگاه ادراری (UTI) جمع آوری گردید. با بهره گرفتن از تست های بیوشیمیایی متداول E.coli بودن ۷۰ نمونه تایید گردید. مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری اشریشیا کلی یوروپاتوژن با بهره گرفتن از روش Kirby – Bauer مورد بررسی قرار گرفت. تشکیل بیوفیلم این باکتری با روش میکروتیترپلیت بررسی شد. به منظور بررسی اتصال باکتری و میزان هیدروفوبیسیتی ، روش هیدروکربن اکتان استفاده شد. پس از استخراج DNA با بهره گرفتن از کیت استخراج، حضور ژن های pap و sfa به روش Multiplex PCR مورد بررسی گرفت.
از مجموع ۱۰۰ نمونه مورد بررسی به کمک روش های بیوشیمیایی متداول ۷۰ نمونه به عنوان اشریشیا کلی یوروپاتوژن شناسایی شدند. نتایج نشان دادن که این باکتری با هیدروفوبیسیتی ۲۳% توانایی تشکیل بیوفیلم را دارد. از نظرمیزان تشکیل بیوفیلم ۸۶% قدرت بسیار کم، ٨/٢ ٪ قدرت متوسط و ٢/١١٪ دارای قدرت بسیار بالا نشان دادند. همچنین بر اساس نتایج بدست آمده از آزمایش Multiplex PCR بر روی ۱۰ نمونه ای که بالاترین قدرت تشکیل بیوفیلم را داشتند، ۱۰نمونه (۱۰۰٪) واجد ژن pap، ۷ نمونه (۷۰٪) واجد ژن sfa و ۷ نمونه (۷۰٪) نیز به طور همزمان دارای ژن pap و sfa بودند.
نتایج این مطالعه نشان داد که ژن های pap و sfa شایعترین ژن های کد کننده پیلی در اشریشیا کلی های جدا شده از عفونت ادراری هستند که می توانند به اتصال این باکتری به بافت های میزبانی و تشکیل بیوفیلم های مقاوم به آنتی بیوتیک کمک کنند.
واژه های کلیدی: عفونتهای دستگاه ادراری، اشریشیا کلی یوروپاتوژن، تشکیل بیوفیلم، Multiplex PCR
مقدمه:
اشریشیا کلی بیشترین گونه باسیل گرم منفی شایع در فلور مدفوعی است. این باکتری یک گونه فوق العاده متنوع است که توانایی کلونیزه شدن و پایداری در نیچ های بیشماری در میزبان های حیوانی، انسانی و محیط را دارد. بعضی از سویه های اشرشیا کلی می توانند از سویه های کامنسال خودشان متمایز شوند، بیماریزایی طبیعی بیشتر و توانایی ایجاد بیماریهای جدی تر در دستگاه گوارش، بافت ها و اندام های دیگر میزبان ایجاد کنند. این سویه های پاتوژن به طور گسترده به عنوان اشرشیا کلی اسهال زا یا اشرشیا کلی پاتوژن خارج روده ای Extra-intestinal Pathogenic E.coli;ExPEC ) ) طبقه بندی می شوند. از میان ExPEC ها، سویه های اشرشیاکلی یوروپاتوژن (Uropathogenic E.coli; UPEC)با بیماریزایی انسانی در ارتباط است. سویه های UPEC به عنوان فرصت طلب داخل سلولی عمل می کنند و با توجه به حساسیت و رفتار میزبان و توسط به کارگیری فاکتورهای ویرولان مختلف برای کلونیزه شدن در دستگاه ادراری برتری کسب می کنند. ( Johnson et al. 1998; Johnson. 2002; Marrs et al. 2005)
UPEC در مجاری ادراری می تواند در مثانه کلونیزه شود و ایجاد التهاب مثانه (Cystitis) کند و همچنین می تواند از طریق حالب به کلیه ها صعود کرده و باعث ایجاد پیلونفریت (Pyelonephritis) شود. مولکول و ساختارهای مختلف سطح سلولی در تشکیل بیوفیلم در اشرشیاکلی یوروپاتوژن دخیل هستند (Marrs et al,2005)
بیوفیلم ها مجموعه ای از سلول های میکروبی هستند که به طور برگشت ناپذیر به سطح وابسته اند و به وسیله شستشو ملایم از بین نمی روند. علاوه بر این، تمایز سلول های غیر متصل (Planctonic) به شکل بیوفیلم بالغ، تغییرات فنوتیپی را ایجاد می کند که دارای پیامد های عمده ای از قبیل افزایش مقاومت به عوامل ضد میکروبی و ازبین نرفتن توسط دفاع میزبان است. این تغییرات فنوتیپی باعث تغییر سلول های اشرشیا کلی از حالت غیر متصل (Planctonic) به حالت متصل می شود.(Hanna. 2003)
بیش از ۵۰% همه عفونت های باکتریایی گزارش شده شامل تشکیل بیوفیلم اند. رشد بیوفیلم باکتریهای پاتوژن اغلب منجر به عفونت هایی می شود که تحمل به آنتی بیوتیک ها و پاسخ های ایمنی میزبان را افزایش می دهد ( Lane et al.2007).
فرم در حال بارگذاری ...
|
[دوشنبه 1399-01-11] [ 10:14:00 ب.ظ ]
|
